這一期來認(rèn)識一下多巴胺，以及它是怎么和帕金森病聯(lián)系起來的。多巴胺是一種神經(jīng)遞質(zhì)，它在大腦的多種基本功能中發(fā)揮重要作用，比如行動執(zhí)行、運動控制、動機產(chǎn)生、喚醒、強化和獎賞等高級而復(fù)雜的活動，也包括一些基礎(chǔ)而低級的活動，如泌乳、性滿足、反胃反應(yīng)等。作為一種信號分子，多巴胺負(fù)責(zé)細胞與細胞之間的通信。在大腦中，多巴胺是由特定的神經(jīng)細胞合成并釋放到需要的大腦區(qū)域，在那里與下游神經(jīng)細胞上的多巴胺受體結(jié)合，啟動這些細胞的生物過程。這些多巴胺受體就好比是一把鎖，而多巴胺則是一把鑰匙，這把鑰匙可以開啟5種不同的鎖（對應(yīng)5種不同的多巴胺受體）。當(dāng)多巴胺與某個神經(jīng)細胞特定的受體結(jié)合時，它可以觸發(fā)這個神經(jīng)細胞內(nèi)的電信號或化學(xué)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，從而將信息（指令）傳遞給別的細胞。因此，多巴胺被稱為神經(jīng)遞質(zhì)。這5種不同的多巴胺受體（多巴胺受體1，2，3，4，5）可以根據(jù)多巴胺結(jié)合以后觸發(fā)的生物行為分為兩大類，多巴胺受體1和5被稱為D1樣受體，而多巴胺受體2，3，4則被稱為D2樣受體。在神經(jīng)系統(tǒng)中，神經(jīng)元上的D1樣受體被活化（與多巴胺結(jié)合）后通?？梢援a(chǎn)生興奮或抑制作用。而D2樣受體被活化后則通常產(chǎn)生抑制作用。通過這些不同的受體配對，多巴胺可以在大腦中影響不同的活動。由此可知說多巴胺是傳遞興奮信號或者抑制信號都不準(zhǔn)確，而是要看它與什么受體結(jié)合以及該神經(jīng)元上的各受體分布才能判斷。多巴胺的合成、存儲、釋放和再吸收人體中的多巴胺主要由大腦和腎臟合成。大腦中的多巴胺由神經(jīng)元合成（也稱為多巴胺能神經(jīng)元），而腎臟中的多巴胺由腎上腺髓質(zhì)中的細胞合成。多巴胺可存在于多種食物中，但因其無法穿越血腦屏障，所以無法從食物中攝取，因此大腦中的多巴胺只能由大腦中的多巴胺能神經(jīng)元合成。大腦中的多巴胺水平需要被精準(zhǔn)的調(diào)控，以保證在恰當(dāng)?shù)臅r候產(chǎn)生合適的反應(yīng)。多巴胺在細胞中合成后被運輸?shù)酵挥|囊泡中，在此等待指令，在適當(dāng)?shù)臅r候釋放到突觸間隙中去。通過突觸間隙與突觸后神經(jīng)元樹突上的受體結(jié)合，或者與突觸前神經(jīng)元的軸突末端上的受體結(jié)合。當(dāng)多巴胺與受體結(jié)合并將其活化后，信息就傳遞成功了，于是多巴胺就立刻與受體解離，被膜轉(zhuǎn)運體重新送回多巴胺細胞內(nèi)。在多巴胺細胞內(nèi)，它們被降解或者重新包裹到囊泡中等著再次被釋放到突觸間隙。多巴胺的釋放主要來自兩種信號指令，一種是由多巴胺細胞中的電位驅(qū)動變化信號觸發(fā)的，被稱為相位傳遞（phasictransmission）；一種是在沒有動作電位觸發(fā)的情況下，有少量的多巴胺被釋放，這種情況被稱為緊張性傳遞（tonictransmission），由多種因素調(diào)節(jié)，包括其他神經(jīng)元的活動和神經(jīng)遞質(zhì)的再攝取影響。具有生物活性的多巴胺由一系列酶的作用下代謝為非活性化合物，這些酶包括單胺氧化酶（monoamineoxidase,MAO），兒茶酚-O-甲基轉(zhuǎn)移酶（catechol-O-methyltransferase,COMT），以及醛脫氫酶（aldehydedehydrogenase,ALDH）。多巴胺除了和以上提到的氧化還原酶代謝，還會和氧氣直接發(fā)生氧化反應(yīng)，產(chǎn)生醌和各種自由基，它們會對細胞產(chǎn)生毒性。這也是帕金森病中神經(jīng)元死亡的一個原因之一。圖1.多巴胺的合成、釋放和代謝（參考資料1）大腦中的多巴胺通路多巴胺能神經(jīng)元在神經(jīng)元中占比相對較少，在人腦中僅約400，000個。多巴胺能神經(jīng)元的胞體被限制在大腦中少數(shù)幾個區(qū)域，主要包括黑質(zhì)（substantianigra）、腹側(cè)被蓋區(qū)（ventraltegmentalarea，VTA）、下丘腦后部（posteriorhypothalamus）、弓狀核（arcuatenucleus）、未定帶（zonaincerta）以及腦室周圍核（periventricularnucleus）。位于大腦黑質(zhì)的多巴胺能神經(jīng)元投射到背側(cè)紋狀體（dorsalstriatum），這一通路被稱為黑質(zhì)-紋狀體通路（nigrostriatalpathway），在控制運動功能和學(xué)習(xí)運動技能方面發(fā)揮重要作用。如果這條通路被破壞，那么就會出現(xiàn)帕金森病的主要癥狀。圖2.?大腦中的主要多巴胺通路（參考資料2）腹側(cè)被蓋區(qū)（VTA）中有一組多巴胺能神經(jīng)元投射到大腦的前額葉皮層（prefrontalcortex），被稱為中腦-皮層通路（mesocroticalpathway）；另有數(shù)量較少的一組多巴胺能神經(jīng)元投射到伏隔核（nucleusacumbens），稱為中腦-邊緣系統(tǒng)通路（mesolimbicpathway）。VTA中有一部分多巴胺能神經(jīng)元還向杏仁核（amygdala）、扣帶回（cingulategyrus）、海馬體（hippocampus）和嗅球（olfactorybulb）投射。這些中腦皮質(zhì)邊緣神經(jīng)元在獎勵和動機方面發(fā)揮核心作用。下丘腦后部的多巴胺能神經(jīng)元投射到脊髓，這一投射的主要功能機制還不是很清楚，但是有證據(jù)表明這一區(qū)域和一種被稱為不安腿綜合征（restlesslegsyndrome）的病理狀況相關(guān)。這種綜合征會讓患者產(chǎn)生一種強烈的移動肢體的沖動，尤其是腿部，從而導(dǎo)致難以入睡。弓狀核和室周核內(nèi)的多巴胺能神經(jīng)元投射到腦垂體（pituitarygland），形成結(jié)節(jié)-漏斗通路（tuberoinfundibularpathway），影響催乳素的分泌。未定帶中的多巴胺能神經(jīng)元投射到下丘腦的多個區(qū)域，參與控制促性腺激素的釋放，對青春期后激活生殖系統(tǒng)的發(fā)育不可或缺。除了以上提到的多巴胺能神經(jīng)元和它們的投射區(qū)域，在眼睛的視網(wǎng)膜中還發(fā)現(xiàn)了另一組分泌多巴胺的神經(jīng)元。它們沒有軸突，因此無法產(chǎn)生投射，但它們可以將合成的多巴胺釋放到細胞外介質(zhì)，增強視錐細胞的活性，抑制視桿細胞的活性。這些多巴胺神經(jīng)元的釋放在白天活躍，夜晚沉默，因此可以在明亮條件下增加對顏色和對比度的敏感性，昏暗條件下降低敏感度。多巴胺與帕金森病當(dāng)你想要移動一下你的手或者腿的時候，這個運動的起始需要大腦皮層控制運動的區(qū)域發(fā)出指令而觸發(fā)。這一區(qū)域包含太陽穴正上方到頭蓋骨頂部的區(qū)域，稱為運動皮層。運動皮層還可以分為很多小區(qū)域，它們分別控制不同肢體部位的運動，比如頭頂中心的區(qū)域控制了腿部的運動，而嘴巴和舌頭的運動則是由靠近太陽穴的區(qū)域控制的。雖然運動信號是從大腦的運動皮層觸發(fā)的，但是實際的動作指令卻是在一個叫做基底神經(jīng)節(jié)（basalganglia）的部位控制的。當(dāng)基底神經(jīng)節(jié)接收到來自運動皮層的信號之后，會將接收到的信息進行處理，然后再把這些處理后的信號通過脊髓傳遞到肌肉從而起始動作的發(fā)生。我們可以理解為大腦皮層就像一個興奮的孩子，想要去做一些事情，而基底神經(jīng)節(jié)則像是家長，對孩子的想法進行判斷，決定哪些可以去做哪些不要去做。參與基底神經(jīng)節(jié)信號調(diào)節(jié)的主要區(qū)域是丘腦（thalamus）。丘腦位于大腦中心部位，其作用類似于大腦的中央控制器。所有經(jīng)由脊髓傳入大腦的信號都會通過丘腦，同樣的，所有從大腦發(fā)出的指令也會經(jīng)過丘腦。因此丘腦在運動調(diào)節(jié)中起到了非常重要的作用?；咨窠?jīng)節(jié)處理運動信號有間接和直接兩種途徑。所謂的直接途徑是激勵運動信號進行運動起始，與之相對的間接途徑則是抑制動作的實施。這兩種途徑就像精心編排的交響樂一樣精密合作，對運動的實施進行調(diào)節(jié)?；咨窠?jīng)節(jié)發(fā)出的直接和間接信號途徑都能傳遞到丘腦中，丘腦于是按照接收到的信號來決定到底是應(yīng)該傳遞興奮起來、運動的信號還是不要興奮、別運動的信號。在正常情況下，多巴胺能神經(jīng)元在基底神經(jīng)節(jié)釋放多巴胺，刺激直接通路，抑制間接通路。帕金森病的運動癥狀（如運動遲緩和靜止性顫抖）就是因為基底神經(jīng)節(jié)處理運動信號的這兩條通路出現(xiàn)問題引起的。當(dāng)多巴胺能神經(jīng)元缺失以后，間接通路的抑制被解除，導(dǎo)致丘腦接收到的抑制信號增強，因此傳出抑制信號，最終導(dǎo)致運動系統(tǒng)無法正常工作，這就是帕金森病患者出現(xiàn)運動障礙的主要原理。醫(yī)生在診斷帕金森病的時候，有時會使用一種叫做DAT的腦部掃描測試。這種成像技術(shù)可以評估殼核區(qū)域的多巴胺釋放水平。當(dāng)患者被診斷為帕金森病的時候，其大腦多巴胺能神經(jīng)元通常已經(jīng)喪失了約50%了。主要參考資料1.Wikipedia-Dopamine2.KleinMO,BattagelloDS,CardosoAR,HauserDN,BittencourtJC,CorreaRG.Dopamine:Functions,Signaling,andAssociationwithNeurologicalDiseases.CellMolNeurobiol.2019Jan;39(1):31-59.doi:10.1007/s10571-018-0632-3.Epub2018Nov16.PMID:30446950.

帕金森病（Parkinson’sdisease，PD）是最常見的神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病之一，其發(fā)病與遺傳和環(huán)境因素密切相關(guān)，GBA1是PD最常見的風(fēng)險基因。GBA1基因突變會導(dǎo)致其編碼的葡萄糖腦苷脂酶（glucocerebrosidase,GCase）活性降低，并通過影響脂質(zhì)代謝、自噬-溶酶體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、線粒體等細胞功能而介導(dǎo)PD的發(fā)生。為了能夠全面了解GBA1基因和PD的關(guān)系，有必要對現(xiàn)有的研究進行總結(jié)梳理。近日，中南大學(xué)湘雅醫(yī)院郭紀(jì)鋒教授團隊在TranslationalNeurodegeneration上發(fā)表了題為“Clinical,mechanistic,biomarker,andtherapeuticadvancesinGBA1-associatedParkinson’sdisease”的最新綜述文章。該綜述總結(jié)了GBA1基因與PD關(guān)聯(lián)的最新發(fā)現(xiàn)及意義，描述了GBA1-PD的基因型-表型、發(fā)病機制、生物標(biāo)志物和治療進展，并總結(jié)了目前的研究現(xiàn)狀及未來面臨的機遇和挑戰(zhàn)。（拓展閱讀：郭紀(jì)鋒團隊最新進展，詳見“邏輯神經(jīng)科學(xué)”報道：PharmacolRes綜述︱中南大學(xué)郭紀(jì)鋒團隊評述iPLA2β在神經(jīng)退行性疾病中的作用：從分子機制到治療進展；TranslNeurodegener?綜述︱中南大學(xué)郭紀(jì)鋒團隊評述腸道微生物在帕金森病臨床、機制和治療方面的研究進展；Gut︱郭紀(jì)鋒課題組利用孟德爾隨機化方法探索炎癥性腸病與阿爾茨海默病的雙向因果關(guān)系；BRAIN︱首次!?中南大學(xué)湘雅醫(yī)院唐北沙/郭紀(jì)鋒/李津臣合作繪制中國大陸帕金森病相關(guān)基因突變圖譜）一、GBA1基因及GCase的功能GBA1基因位于染色體1q21上，由11個外顯子和10個內(nèi)含子組成，長度為7.6kb，編碼約62kDa的蛋白質(zhì)GCase，包含三個結(jié)構(gòu)域。目前，已有300多種GBA1變異被報道[1]。GBA1的變異位點在不同種族中的分布差異很大，在猶太人中，最常見的GBA1變異是N370S，歐洲人中的E326K、T369M攜帶率相對較高，東亞和南亞人主要攜帶L444P（圖1）。圖1GBA1基因、GCase蛋白及其三維結(jié)構(gòu)（圖源：ZhangXX,WuH，TangBS,GuoJF,TranslNeurodegener,2024）GBA1基因編碼溶酶體酶GCase，負(fù)責(zé)將葡萄糖神經(jīng)酰胺（GlcCer）分解為神經(jīng)酰胺（Cer）和葡萄糖（Glc）。Cer在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)（ER）中合成后通過囊泡運輸?shù)巾樖礁郀柣w，Cer在GlcCer合成酶（GCS）的催化下生成GlcCer，隨后被運輸?shù)椒词礁郀柣w一側(cè)并轉(zhuǎn)化為乳糖神經(jīng)酰胺（LacCer），然后合成為復(fù)雜的糖磷脂（GSLs）。GSLs通過囊泡運輸至細胞膜，細胞膜的內(nèi)吞作用會觸發(fā)GlcCer的分解，內(nèi)吞過程中GSLs被運送到溶酶體，隨后，溶酶體內(nèi)的GCase將GlcCer分解為Cer和Glc（圖2）。圖2葡萄糖神經(jīng)酰胺（GlcCer）的合成和降解途徑（圖源：ZhangXX,WuH，TangBS,GuoJF,TranslNeurodegener,2024）二、GBA1與PD密切相關(guān)戈謝?。℅aucher’sdiseasedisease，GD）是一種由GBA1基因突變引起的常染色體隱性遺傳病，自20世紀(jì)80年代以來，臨床醫(yī)生注意到許多GD患者可以同時合并PD，這促使人們開始研究GBA1基因作為PD遺傳因素的潛在作用。隨著時間的推移，研究人員發(fā)現(xiàn)無論是GBA1基因的純合還是雜合突變都會增加PD的發(fā)病。2009年，一項全球16個中心的研究顯示，PD患者與對照組相比攜帶GBA1變異的比值比為5.43，突顯了GBA1變異作為PD常見風(fēng)險因素的地位[2]。值得注意的是，GBA1變異的分布具有明顯的種族異質(zhì)性，在猶太人中GBA1變異的攜帶率高達20-30%，在歐洲病人中占5-15%，在中國人中，有5.4%-8.4%的PD患者攜帶GBA1變異，而在普通人群中這一比例不足1%。三、GBA1-PD的基因型-表型基因型和表型之間的關(guān)系復(fù)雜，雖然GBA1-PD的一般特征與特發(fā)性PD相似，但GBA1-PD作為一個整體具有其獨特的臨床特點。GBA1變異加速了神經(jīng)退行性病變的過程，導(dǎo)致多巴胺能神經(jīng)元的功能明顯受損，臨床表型更為嚴(yán)重。GBA1非顯性攜帶者可能會出現(xiàn)典型的PD前驅(qū)癥狀，這些癥狀可能隨著時間的推移而逐漸加重。GBA1-PD往往起病年齡更早，更有可能存在家族史，并伴有更嚴(yán)重的運動和非運動癥狀，尤以認(rèn)知功能受累較為突出，此外，GBA1-PD患者的疾病進展更快，并具有更高的運動并發(fā)癥風(fēng)險，死亡率也更高（圖3）。圖3GBA1-PD的各階段臨床特征（圖源：ZhangXX,WuH，TangBS,GuoJF,TranslNeurodegener,2024）四、GBA1參與PD的機制研究正常情況下，GBA1基因的mRNA從細胞核進入內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。GCase在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中產(chǎn)生，通過與蛋白質(zhì)LIMP2結(jié)合轉(zhuǎn)移到高爾基體，然后與溶酶體融合，在溶酶體中GCase被激活以發(fā)揮其水解作用。通常，α-syn可被自噬體吞噬，然后轉(zhuǎn)移到溶酶體，GCase在溶酶體中與α-syn相互作用，促進其降解。GBA1突變會損害GCase的活性，GCase蛋白折疊錯誤并滯留在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，從而引發(fā)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激。溶酶體中缺乏GCase會損害自噬-溶酶體途徑，導(dǎo)致脂質(zhì)底物在溶酶體中積聚并增加α-syn的聚集。這種積聚會阻止GCase從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)/高爾基體轉(zhuǎn)運到溶酶體，從而加劇溶酶體功能障礙。GCase缺乏和自噬-溶酶體功能障礙也可能會導(dǎo)致線粒體功能障礙，造成氧化應(yīng)激、ATP生成減少和線粒體形態(tài)異常。此外，GCase缺乏、脂質(zhì)和α-syn積累可能激活小膠質(zhì)細胞導(dǎo)致神經(jīng)炎癥。所有這些都會導(dǎo)致細胞死亡和PD的發(fā)生（圖4）。圖4GBA1突變在PD中的作用機制（圖源：ZhangXX,WuH，TangBS,GuoJF,TranslNeurodegener,2024）五、GBA1-PD的生物標(biāo)志物研究目前仍缺乏GBA1-PD的客觀生物標(biāo)志物，但GCase通路的功能障礙為發(fā)現(xiàn)GBA1-PD的潛在生物標(biāo)志物提供了思路。Gcase的活性及其底物（GlcCer、GlcSph等）水平可以在腦組織和血液等樣本中測定，這些有前景的生物標(biāo)志物有可能改善患者的早期診療，并成為評估GCase靶向治療效果的指標(biāo)。然而，總體來看，現(xiàn)有證據(jù)并不支持將GCase活性降低、GlcCer或GlcSph積累作為PD的可靠生物標(biāo)志物。盡管GBA1變異攜帶者表現(xiàn)出腦組織、血液、成纖維細胞中GCase活性的下降，但患者與對照組之間存在很大的重疊。GCase活性在人群中的波動很大，除受GBA1突變類型的影響外，還與研究對象的組成、檢測樣本的儲存條件和時間、樣本凍融的次數(shù)以及檢測方法有關(guān)，而且還可能受到各種遺傳或環(huán)境因素的干擾。同樣，有關(guān)GlcCer、GlcSph水平的研究結(jié)果相互矛盾，因此這些底物也不能作為GBA1-PD的可靠生物標(biāo)志物。有研究者提出，由于GCase反應(yīng)是復(fù)雜的鞘脂循環(huán)途徑的一部分，因此分析GCase活性降低對整個鞘脂循環(huán)途徑的影響對于得出有意義的結(jié)論十分重要，此外，有必要對GlcCer、GlcSph以外的細胞通路開展研究，以確定GBA1突變與PD之間的分子聯(lián)系。六、GBA1-PD的治療精準(zhǔn)和個性化的治療是PD未來的治療方向，GBA1變異與PD之間的密切聯(lián)系為開發(fā)針對GCase通路的療法提供了機會，是探索PD新型藥物最有希望的靶點。攜帶GBA1變異的PD患者通常表現(xiàn)出更具侵襲性的疾病進展，因此有必要采取更積極的策略來改善預(yù)后。靶向GBA1治療的基本原理是調(diào)節(jié)GSLs的周轉(zhuǎn)以及糾正細胞內(nèi)GCase的缺陷。具體方法包括酶替代療法（ERT）、底物還原療法（SRT）、分子伴侶治療和基因治療。ERT和SRT已被證明是治療GD的有效方法（圖5）。ERT使用重組GCase酶來替代患者體內(nèi)缺乏的GCase酶。然而，ERT無法穿透血腦屏障，因此在治療GD神經(jīng)癥狀方面的療效有限。SRT可通過抑制GlcCer合成酶（GCS）防止GlcCer過度積累。然而，與ERT類似，SRT也面臨著穿透血腦屏障困難的挑戰(zhàn)。具有血腦屏障通透性的GCS抑制劑（如venglustat）可減少腦內(nèi)GCase的底物積累，降低實驗動物體內(nèi)的α-syn水平，改善動物行為。然而，來自臨床的研究結(jié)果雖然顯示venglustat具有良好的安全性、耐受性，但并不具有明顯的治療效果[3]。具有激活Gcase活性的小分子可以起到穩(wěn)定和改善神經(jīng)癥狀的作用，最近，有幾種藥物成為改善GCase活性的潛在增強劑。其中，氨溴索已被證明能增強GCase的活性，是針對GCase通路最有前景的小分子伴侶療法。臨床試驗表明，氨溴索具有良好的腦脊液通透性，安全可耐受，同時還能改善患者的運動評分。這些令人鼓舞的結(jié)果為氨溴索治療GBA1-PD的Ⅲ期臨床試驗鋪平了道路。圖5ERT、SRT和分子伴侶治療的靶點（圖源：ZhangXX,WuH，TangBS,GuoJF,TranslNeurodegener,2024）基因治療通過將治療基因及其調(diào)控成分導(dǎo)入細胞核，來糾正與疾病相關(guān)的基因異常。就GBA1-PD而言，將攜帶完整GBA1基因序列的病毒載體注入體內(nèi)，通過提高GCase活性，減少底物、α-syn的積累，起到保護多巴胺能神經(jīng)元，改善癥狀的目的（圖6）?；诨A(chǔ)研究的證據(jù)，目前正在臨床上開展腺相關(guān)病毒（AAV）治療GBA1-PD的研究。圖6GBA1-PD的基因治療（圖源：ZhangXX,WuH，TangBS,GuoJF,TranslNeurodegener,2024）七、展望最后，作者結(jié)合當(dāng)下的研究現(xiàn)狀及涌現(xiàn)出的新技術(shù)、新方法，對GBA1-PD未來的研究方向進行了展望。指出目前對各種突變的生物學(xué)效應(yīng)的了解仍不全面，現(xiàn)有的細胞和動物模型很難完全模擬神經(jīng)退行性疾病的復(fù)雜過程，根據(jù)不同的研究目的選擇合適的模型十分重要。iPSCs、類器官、溶酶體模型、基因編輯、光遺傳學(xué)等技術(shù)的發(fā)展，將為探索GBA1-PD的發(fā)病機制提供更完善的技術(shù)支持。由于每種治療方式有其自身的優(yōu)缺點，因此有必要結(jié)合多種治療策略來綜合治療PD。隨著GCase調(diào)節(jié)劑、細胞治療、反義寡核苷酸、microRNAs、ncRNAs和CRISPR-Cas9等新型療法和技術(shù)的出現(xiàn)，將為GBA1-PD的治療帶來新的機遇。最后，隨著大量隊列研究數(shù)據(jù)的積累、標(biāo)準(zhǔn)化實驗流程的建立、檢測技術(shù)的進步、全球合作的開展，相信在GBA1-PD的臨床、機制、生物標(biāo)志物以及治療方面將會取得一系列新的進展原文鏈接：https://doi.org/10.1186/s40035-024-00437-6

帕金森病具有進展性，隨著時間的推移癥狀會越來越重，早期治療一般是選擇藥物控制，一般用藥后身體僵直、震顫等癥狀能得到改善，如果用藥效果變差，是需要手術(shù)治療的。以前腦起搏器手術(shù)醫(yī)保無法報銷的時候，手術(shù)治療患者往往是盡可能的托，目前醫(yī)保報銷政策越來越好，一般自費四五萬，所以根據(jù)評估結(jié)果，手術(shù)治療時機是可以適當(dāng)提前的，盡早治療才能提高生活質(zhì)量。手術(shù)治療前，先判斷帕金森病分期：帕金森病1期1期是疾病最早的時期，癥狀輕并且僅見于單側(cè)肢體（單側(cè)受累），通?；颊吖δ懿皇苡绊懟騼H受很小影響。此期患者癥狀如此輕微以至于患者很少主動就醫(yī)或者醫(yī)生很難做出診斷。1期癥狀主要包括震顫和僵硬：震顫可表現(xiàn)為一側(cè)手的間歇性震顫。僵硬表現(xiàn)為感覺到一側(cè)手或腿比另一側(cè)笨拙，或者一側(cè)面部受累而影響面部表情。這一期診斷困難，醫(yī)生或許希望在做出正式診斷前觀察癥狀是否加重。帕金森病2期2期仍被認(rèn)為是帕金森病的早期階段，這一期的特征為軀體雙側(cè)癥狀（雙側(cè)受累）或軀干癥狀，尚未累及平衡功能。2期可在1期之后數(shù)月或數(shù)年發(fā)展形成。癥狀包括：雙側(cè)面部表情減少，瞬目減少；言語功能異常，音調(diào)變得柔和且單調(diào)，大聲講話后音量減低；口齒不清；軀干肌肉僵硬而導(dǎo)致頸部或背部疼痛，駝背以及日常活動普遍速度減慢；此期患者仍能維持日常生活能力，伴有震顫的患者在此期容易得到診斷。然而，如果此前漏診了1期，并且在2期時癥狀僅是動作遲緩或缺乏自主運動，那么此期仍有可能被漏診，PD的癥狀可能被誤認(rèn)為是年齡相關(guān)表現(xiàn)。帕金森病3期3期是帕金森病的中期，以平衡障礙和運動遲緩為特征。這一階段跌倒十分常見，因為患者無法迅速做出本能的反應(yīng)來預(yù)防跌倒，因而平衡受損，并且在這一階段跌倒十分常見。此階段帕金森病的其他癥狀同樣多見，通常3期時患者的診斷比較明確。醫(yī)生常通過患者的反應(yīng)協(xié)助診斷，即后拉試驗：醫(yī)生站在患者身后，輕拉患者肩膀，觀察患者是否難以維持平衡，是否向后跌倒（當(dāng)然醫(yī)生在其身后保護不會使患者跌倒）。3期十分重要的一點是患者仍然能夠完全獨立完成日?；顒?，例如穿衣，個人衛(wèi)生整理和進食。從椅子上起立困難，行走身體前傾，步態(tài)緩慢。帕金森病4期在這一時期，帕金森病已經(jīng)進展為十分嚴(yán)重的致殘性疾病?；颊呋蛟S能夠在不需要幫助的條件下行走和站立，然而可以明顯得看出患者功能受損。很多患者需要使用助步器。這一階段患者不能獨立生活，很多日常生活事項需要他人協(xié)助。這一期可定義為患者日常生活需要幫助。如果患者仍然有能力獨自生活，那么定義為3期。帕金森病5期5期是帕金森病的晚期階段，主要特征為無法從椅子上起立或者沒有幫助無法起床，患者站立或轉(zhuǎn)身時可有跌倒傾向，行走時可感覺到步態(tài)凍結(jié)或走路跌跌撞撞。這一時期患者需要全天候不間斷的幫助來減少跌倒風(fēng)險并且維持日?；顒印４穗A段的患者可經(jīng)歷幻覺或錯覺。盡管帕金森病患者的癥狀將隨時間加重，但值得注意的是部分患者從不會到達5期。并且患者在不同時期進展的時間長度也各不相同。一個患者可能不會出現(xiàn)所有癥狀，例如患者可能存在震顫的癥狀但平衡功能不受累及。一般發(fā)展到三期，藥物治療逐漸出現(xiàn)運動并發(fā)癥，會感覺到藥物效果銜接不上、劑末現(xiàn)象、開關(guān)現(xiàn)象及異動現(xiàn)象等。這個時候手術(shù)治療效果最佳，在改善震顫、僵直、運動障礙等問題的同時，還能預(yù)防并發(fā)癥的發(fā)生。此外，疾病的每個時期都有相應(yīng)的治療方式。當(dāng)然，我們?nèi)孕栌涀?，越早診斷越好。換言之，診斷時患者分期越早，治療將越有療效，對緩解患者癥狀有很大幫助。

帕金森病患者最終就是要手術(shù)治療，那不如就等等，等后期實在不行了再做腦起搏器手術(shù)，而且說不定以后還有能治愈的方法。這里需要提醒一下大家，帕金森病目前沒有可以治愈的方法，腦起搏器手術(shù)是藥物蜜月期后唯一的方法。但是手術(shù)治療也不是沒有限制的。首先，年齡一般不超過75歲，如果身體條件好的話可以延長到80歲，超過這個年齡段、或者由于年齡逐漸變大而出現(xiàn)身體機能下降，就不能手術(shù)治療了。因為年齡太大了以后，他的全身情況，各個器官都衰老，這樣他手術(shù)風(fēng)險會增大。當(dāng)然我們也會來全面進行評估，如果這個病人他的病情，這個帕金森病確實比較重，確實需要手術(shù)治療，同時他的整個身體情況，也還比較好，可能會適當(dāng)放寬一點。所以說年齡是一個相對的一個條件，所以說我們對每個病人，進行個體化的一個評估，這樣使他的手術(shù)的收益達到最高，同時讓他的風(fēng)險盡可能降到最低。其次，如果患帕金森病病程較長，長期的異常姿勢，導(dǎo)致關(guān)節(jié)變形，抑郁、認(rèn)知障礙，乃至癡呆，無法配合手術(shù)治療及術(shù)后程控，也是無法手術(shù)治療的。對于關(guān)節(jié)變形嚴(yán)重的患者，術(shù)后康復(fù)糾正的機會效果甚微。腦起搏器手術(shù)是可控、可逆的后期會不會有治愈的方法？只能說目前沒有，當(dāng)然醫(yī)療技術(shù)不斷發(fā)展，以后也是治愈的可能，但是現(xiàn)在大家不應(yīng)該為了還沒有的醫(yī)療技術(shù)而盲目措施能提高生活治療的機會，而且腦起搏器手術(shù)是不損傷腦組織的，是將電極植入核團，是可以拔出的，不會影響往后選擇其他治療的機會。而且根據(jù)帕金森病不斷進展的特點，術(shù)后還可以根據(jù)病情的進展來調(diào)整治療參數(shù)。

帕金森?。≒D）是最常見的神經(jīng)退行性疾病之一，全球范圍內(nèi)PD的患病人數(shù)已超過1000萬。盡管目前已有部分對癥治療藥物可改善患者癥狀，但延緩疾病進展的疾病修飾療法（DMT）的研發(fā)仍沒有顯著突破。最新發(fā)表的2024年帕金森病臨床研發(fā)管線綜述顯示，在截至2024年1月處于活躍狀態(tài)的136項臨床研究中，疾病修飾療法的3期研究僅有3項。帕金森病的疾病修飾治療，離我們還有多遠？2024年帕金森病臨床研發(fā)管線概覽在此次綜述納入的136項臨床研究中，101項研究是既往已經(jīng)注冊的研究，35項是2023年至2024年之間新注冊的臨床研究。其中，數(shù)量最多的是2期研究（79項，58%），其次為1期研究（41項，30%），最少的為3期研究（僅16項，12%）。從作用類別來看，有76項（56%）為對癥治療（ST）研究，60項（44%）為疾病修飾治療（DMT）研究。值得一提的是，盡管PD藥物的臨床開發(fā)困難重重，但從2020年至今的5年內(nèi)PD總體臨床研究的數(shù)量趨于穩(wěn)定，而DMT的臨床研究比例維持在40%左右。從研究藥物的創(chuàng)新性來看，有51項（38%）研究藥物為全新分子，有52項（38%）研究藥物為已上市產(chǎn)品的重新利用，即進行新適應(yīng)癥的臨床開發(fā)。此外，還有26項（19%）研究藥物為已上市產(chǎn)品新劑型的開發(fā)，7項（5%）研究為已上市產(chǎn)品新的治療作用的探索（NewClaim）。136項臨床研究預(yù)計總體招募人數(shù)為16649例，其中2期臨床研究招募的受試者占總?cè)藬?shù)的60%。另外，作者發(fā)現(xiàn)，有4項2期臨床研究和4項3期臨床研究預(yù)計招募受試者超過500例。這些研究預(yù)計招募受試者的總數(shù)（5286例）占所有研究招募受試者總數(shù)的32%。從2023年1月至2024年1月期間，24項臨床研究順利完成。其中，有12項DMT的臨床研究已完成，包括9項1期，2項2期和1項3期臨床研究。7項DMT臨床研究公布了初步的結(jié)果，包括間充質(zhì)干細胞、Anle138b、NE3107、IkT-148009、鋰和UB-312等在內(nèi)的6項研究結(jié)果積極。完成這24項臨床研究的平均時間是29個月，2期研究平均需要3年完成，而3期臨床研究平均需要3.5年完成。有高達41%（57項）臨床研究的實際完成時間與預(yù)計完成時間相比，出現(xiàn)了顯著推遲（delay），平均延長的研究時間為9個月。疾病修飾治療：在研靶點有哪些？在所有對癥治療研究中，多巴胺能癥狀緩解治療的研究共有23項（占比31%），主要為多巴胺受體激動劑，左旋多巴新劑型類藥物和其他多巴胺能藥物。有43項（57%）研究藥物靶向非多巴胺能神經(jīng)遞質(zhì)系統(tǒng)，包括腎上腺素能、膽堿能、血清素和谷氨酸通路的藥物。其余對癥治療研究藥物的靶點還包括抗炎，細胞治療以及靶向微生物菌群/胃腸道的療法。從對癥治療研究藥物治療的靶向癥狀來看，23項研究旨在改善整體運動和/或非運動癥狀。運動波動和左旋多巴誘導(dǎo)的異動癥是對癥治療研究藥物最常針對的癥狀。此外，也有許多特異性針對非運動癥狀的對癥治療藥物正在臨床開發(fā)中，包括認(rèn)知障礙、抑郁、步態(tài)和平衡障礙，以及精神癥狀/幻覺等。對于疾病修飾治療藥物的臨床研究，占比最高的為靶向α-突觸核蛋白的治療（9項，占比15%），其次分別為其他不能分類的DMT治療產(chǎn)品、靶向GBA和抗炎的療法。值得注意的是，與2023年管線相比，靶向GBA和抗炎類產(chǎn)品的臨床研究數(shù)量和比例均有大幅提升，從去年的3項研究分別增加到7項和6項臨床研究。在所有60項DMT的臨床研究中，僅有三種藥物處于3期臨床研究階段，分別為艾塞那肽（GLP-1受體激動劑）,氨溴索（提高Gcase酶活性）以及嗜酸乳桿菌（靶向腸道菌群）。受到利司那肽今年年初積極2期數(shù)據(jù)結(jié)果的影響，艾塞那肽的這項三期研究結(jié)果預(yù)計將得到更多關(guān)注。未來展望：路在何方？盡管目前仍缺乏成功的疾病修飾治療藥物，作者仍充滿希望地總結(jié)了最近一年在帕金森病生物標(biāo)志物方面取得的重大進展，包括：提出了首個基于α-突觸核蛋白生物標(biāo)志物的生物學(xué)分期標(biāo)準(zhǔn)α-突觸核蛋白seeding活性（SAA）檢測可作為帕金森病和其他突觸核蛋白病的一種特異性檢測方法；一種基于血液學(xué)的線粒體損傷檢測方法，對于檢測靶向LRRK2分子的生物學(xué)作用有特定的價值；腦脊液中多巴脫羧酶水平顯著升高；腦部囊泡單胺轉(zhuǎn)運體2成像可作為早期PD疾病進展的指標(biāo)之一；新的生物學(xué)診斷標(biāo)準(zhǔn)，以及新型生物標(biāo)志物檢測方法應(yīng)用于部分臨床研究中，比如UB-312的1期研究中使用了SAA作為探索性指標(biāo)之一。在未來的藥物臨床研究中，如果使用更新的生物學(xué)診斷標(biāo)準(zhǔn)，允許在更早期精準(zhǔn)找到干預(yù)人群，且使用更敏感和特異性的檢測工具，帕金森病的疾病修飾療法是否也能夠像阿爾茨海默病的治療那樣，迎來屬于自己的春天？主要參考資料：1.?McFarthingK,BuffS,RafaloffG,PitzerK,FiskeB,NavangulA,BeissertK,PilcickaA,FuestR,WyseRK,StottSRW.Parkinson'sDiseaseDrugTherapiesintheClinicalTrialPipeline:2024Update.JParkinsonsDis.2024;14(5):899-912.?2.McFarthingK,BuffS,RafaloffG,FiskeB,MursaleenL,FuestR,WyseRK,StottSRW.Parkinson'sDiseaseDrugTherapiesintheClinicalTrialPipeline:2023Update.JParkinsonsDis.2023;13(4):427-439.?

什么是帕金森病？???帕金森病是一種影響中樞神經(jīng)系統(tǒng)的神經(jīng)退化疾病。???中樞神經(jīng)系統(tǒng)包括我們的腦和脊髓。帕金森病是大腦中，位于中腦部分一個叫黑質(zhì)致密部的區(qū)域里面的多巴胺神經(jīng)元大量死亡導(dǎo)致的。多巴胺是中樞神經(jīng)系統(tǒng)的重要神經(jīng)遞質(zhì)（也就是傳遞大腦信號的信使），它們參與了我們的精神活動和運動，包括認(rèn)知、運動、沖動和愉悅感等等。當(dāng)產(chǎn)生多巴胺的神經(jīng)元死了，那么靠多巴胺調(diào)節(jié)的神經(jīng)功能也會出現(xiàn)問題。所以在帕金森病人身上會出現(xiàn)運動功能問題，包括靜止性震顫、行動遲緩、肌肉僵直、姿勢不穩(wěn)易摔倒等等。在運動癥狀出現(xiàn)之前，帕金森病患者通常會先出現(xiàn)一些非運動癥狀，如嗅覺減退、睡眠障礙、便秘、抑郁、焦慮、直立性高血壓等。帕金森病的發(fā)現(xiàn)???帕金森病是由英國醫(yī)生詹姆斯·帕金森（JamesParkinson，1755年4月11日-1824年12月21日，他也是一名地質(zhì)學(xué)家，古生物學(xué)家和社會活動家）在1817年最早詳細記錄下來的，當(dāng)時他把這個疾病的癥狀稱為震顫性麻痹。后來法國的神經(jīng)學(xué)家和解剖病理學(xué)家沙爾科（Jean-MartinCharcot,1825年11月29日-1893年8月16日）對這個疾病進行了詳細的研究，并在1872年把這個疾病命名為帕金森病，以紀(jì)念詹姆斯·帕金森醫(yī)生?，F(xiàn)在，每年的4月11日，也就是帕金森醫(yī)生的生日被作為世界帕金森病日，用來喚起大家對這個疾病的關(guān)注。（因為帕金森醫(yī)生1824年去世了，而現(xiàn)存最早的照片是1826年拍攝的，所以只能找到帕金森醫(yī)生的簽名看看。）???代表帕金森病的是一朵紅白相間的郁金香，被稱為帕金森之花。這是荷蘭的一位園藝家培養(yǎng)出來的，這位園藝家自己就是帕金森病患者，為了感謝帕金森醫(yī)生對這個疾病的細心觀察從而帶動了醫(yī)學(xué)界對帕金森病的研究，他就將這株郁金香命名為詹姆斯·帕金森之花。從此這朵郁金香就被作為帕金森病的象征。帕金森之花????帕金森病通常被認(rèn)為是一種老年病。全世界范圍內(nèi)，大概每100個65歲以上的老年人中就有2-4個人會得此病，是神經(jīng)系統(tǒng)疾病患病人數(shù)僅次于阿爾茲海默癥的疾病。世界衛(wèi)生組織官網(wǎng)信息顯示，據(jù)2019年的估計數(shù)據(jù)，全球的患病人數(shù)大概在850萬人左右，男性患者多于女性患者。隨著人口老齡化的加劇，帕金森病患者也呈現(xiàn)逐年上升的趨勢。帕金森病的病因是什么？???雖然帕金森病已經(jīng)被研究了兩百多年，但其病因非常復(fù)雜，到現(xiàn)在還沒有假說被確證。有三個方面的因素被認(rèn)為與帕金森病的形成有關(guān)：年齡、環(huán)境和遺傳因素。年齡越大越容易得帕金森病。環(huán)境因素包括頭部創(chuàng)傷（頭部創(chuàng)傷是外部力量造成的，所以也算環(huán)境因素），暴露在殺蟲劑和除草劑中可能會增加患帕金森病的風(fēng)險。遺傳因素是指一些基因的改變也會導(dǎo)致患病風(fēng)險增加，現(xiàn)在至少有23個基因和遺傳位點被認(rèn)為與帕金森病有關(guān)系。這些基因突變中的某一些會導(dǎo)致攜帶這種突變的人在比較年輕的時候就患病。遺傳因素中被研究的最多的是?-突觸核蛋白（?-synuclein），這個蛋白在病人的神經(jīng)元中凝聚成團，被稱為路易小體（Lewybody），最后神經(jīng)元死亡，同時還會導(dǎo)致大腦中出現(xiàn)炎癥反應(yīng)。帕金森病的治療???由于帕金森病是神經(jīng)細胞死亡導(dǎo)致的，而死亡的細胞沒有辦法復(fù)活，因此帕金森病目前還沒有辦法治愈，只能通過針對疾病的癥狀進行緩解治療。最常用也是最優(yōu)選的方法是補充多巴胺。因為帕金森病是產(chǎn)生多巴胺的神經(jīng)細胞死亡了，所以我們可以通過給大腦補充多巴胺來一定程度上維持神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)的正常工作。???如果補充多巴胺沒有辦法緩解癥狀，可以嘗試使用腦深部電極刺激（DBS），也就是不通過神經(jīng)遞質(zhì)這種化學(xué)分子，而是直接使用電流對大腦進行刺激產(chǎn)生信號。DBS可以直接測量病理性腦活動，并提供可調(diào)節(jié)的刺激，可以治療和電生理功能相關(guān)的神經(jīng)和精神類疾病。DBS是一種神經(jīng)外科手術(shù)，涉及將電極植入大腦中的特定位置，并從植入人體的電池電源中提供電流。???細胞療法是使用新的細胞去替代大腦中死亡的細胞，是一種具有潛力的治療策略。最早的嘗試是將胚胎的腦組織移植到病人的大腦中，這些來自胚胎的神經(jīng)組織可以在病人中發(fā)揮功能?，F(xiàn)在，干細胞可以來自皮膚細胞，這些細胞在培養(yǎng)過程中加入特定的生長因子就可以變成干細胞，然后再加入相關(guān)的因子讓它們分化成可以產(chǎn)生多巴胺的神經(jīng)細胞，再移植到病人的大腦中。除了皮膚細胞誘導(dǎo)產(chǎn)生干細胞，干細胞還可以從骨髓、脂肪、以及臍帶組織獲得。帕金森病的細胞療法目前還處于研究階段。

羅替高汀是經(jīng)典的多巴胺受體激動劑，作為美多芭、息寧等左旋多巴類藥物的協(xié)同用藥，可有效緩解中晚期帕金森病患者的震顫、遲緩、僵直等運動癥狀，改善關(guān)期困境，受到國內(nèi)外帕金森病治療指南的推薦。緩釋微球技術(shù)利用先進工藝可以將藥物溶解或分散在高分子材料基質(zhì)中，形成直徑在5～250μm之間的微型球體。這一劑型有很多優(yōu)勢。給藥后高分子微球降解，穩(wěn)定釋放受載藥物，避免出現(xiàn)血藥濃度大幅波動，藥效平穩(wěn)，減小了毒副作用。此外，這種技術(shù)可以降低給藥頻率，提高藥物的生物利用度，患者更容易接受。羅替高汀的微球制劑，每周用藥一次，用藥便捷，可以持續(xù)、穩(wěn)定的刺激多巴胺受體，符合CDS治療理念，是帕金森病患者長期管理的一個良好選擇。目前已經(jīng)成為容易獲得的國內(nèi)治療帕金森病的新型藥物。

選取適齡的小鼠使用三溴乙醇腹腔注射進行麻醉，之后使用剃毛器剃除頭部毛發(fā)，使用立體定位儀定位目標(biāo)皮層。然后使用高速顱骨鉆，鉆出一個大約0.2mm2的小洞，隨后使用微量注射控制臺和微量注射泵將相關(guān)腺相關(guān)病毒注射到目標(biāo)皮層的第五層，速度設(shè)置為40nL/min，注射完成后留針10-15min，以防止病毒泄露至其他區(qū)域。病毒注射完成后，涂抹碘伏殺菌，然后將頭皮縫合，放回到鼠籠，等待病毒表達及相關(guān)處理。雙光子在體鈣成像實驗由于需要做小鼠活體清醒時鈣成像實驗，所以該實驗分為兩步進行。在第一天準(zhǔn)備階段，首先選取實驗小鼠腹腔注射三溴乙醇進行麻醉，使用剃毛器剃除頭部毛發(fā)，之后使用手術(shù)剪去除頭皮組織，并使用酒精棉球擦拭除去顱骨表面結(jié)締組織，向小鼠眼睛涂抹卡波姆滴眼液。隨后將兩根固定棒以恰當(dāng)?shù)木嚯x平行粘在小鼠顱骨上，進一步使用牙科水泥進行加固。等待固定完成后，將小鼠放回鼠籠飼養(yǎng)。第二天進行實驗階段，在正式實驗之前將小鼠提前固定適應(yīng)0.5-1h，然后使用高速顱骨鉆在目標(biāo)腦區(qū)制作一個圓形成像區(qū)域，小心去除顱骨，避免出血，保留硬腦膜，隨后蓋上蓋玻片并使用膠水封閉縫隙。等待膠水凝固后，用ACSF小心清洗蓋玻片表層，去除污漬后滴加超純水后，就可以進行雙光子成像。成像時在Time?series模式下以2Hz的速度進行圖像采集。所采集得到的圖像使用ImageJ軟件進行分析。轉(zhuǎn)棒實驗加速轉(zhuǎn)棒實驗被用來檢測小鼠的運動學(xué)習(xí)能力。該實驗使用Rotamex?Rotarod系統(tǒng)，參數(shù)設(shè)置為：最小速度2rmp，最大速度為80rmp，加速度為5，單方向轉(zhuǎn)動。共分為三天進行，在每天中午進行三次測量，每次開始之前使用酒精擦拭除去味道，并將小鼠放于2rmp轉(zhuǎn)棒上適應(yīng)1min，然后開始計時直到小鼠掉落或者小鼠抱杠旋轉(zhuǎn)3圈為止，最后統(tǒng)計每只小鼠三次時間取平均值代表該小鼠當(dāng)天運動能力。曠場實驗曠場實驗被用于檢測小鼠焦慮情緒及自主運動能力。該實驗使用50cm×50cm×50cm的透明曠場，曠場中心區(qū)域為（25cm×25cm），使用動物行為分析軟件來跟蹤記錄和分析小鼠在曠場中10min的運動軌跡及時間。使用中心區(qū)域停留時間來衡量小鼠的焦慮水平，在曠場內(nèi)總移動距離衡量小鼠自主運動能力。爬桿實驗爬桿實驗是用來檢測小鼠的肢體協(xié)調(diào)能力的實驗之一。該實驗是將一直徑為2.5cm的乒乓小球固定于一根長為70cm、直徑為1cm的竹竿頂端，并在竹竿上纏紗布防止打滑。將小鼠置于球頂，使其沿著垂直竹竿從上向下爬動，記錄所使用時間，共進行三次，每次間隔5min。在正式開始之前一天，讓小鼠學(xué)習(xí)2-3次。平衡木實驗（橫桿跑動實驗）平衡木實驗（橫桿跑動實驗）被用來檢測小鼠平衡能力和運動能力。該實驗在一昏暗安靜房間進行，使用一寬3cm，長70cm的扁平木板，并在平衡木一端連接一干凈小鼠的鼠籠，整個裝置距離地面高100cm。將小鼠放到平衡木另一端，記錄小鼠從平衡木一端穿越到鼠籠所用的時間，共進行三次，每次間隔5min。在正式實驗開始之前，訓(xùn)練小鼠3-5次。埋珠實驗埋珠實驗被用于檢測小鼠的焦慮水平及刻板行為。該實驗在一安靜環(huán)境下進行，將小鼠單獨放入一個實驗箱，鋪滿高5cm的墊料，并放入15顆大理石珠，共放3排，每排5顆，測試10min，然后人工統(tǒng)計掩埋體積>50%的大理石珠數(shù)量，共進行三次。巴恩斯迷宮實驗巴恩斯迷宮被用于評估小鼠的空間學(xué)習(xí)和記憶能力。該實驗在安靜黑暗環(huán)境下進行，使用一個直徑為60cm，厚度為15mm的圓形乳白色亞克力板制作而成，在其邊緣1cm處均勻分布有12個直徑為5cm的圓洞，同時配備有兩個五面的開放性黑色盒子，規(guī)格分別為20cm×8cm×8cm及10cm×10cm×10cm，一個為起始盒，一個為躲避盒，整個裝置被放置于距離地面100cm高的可旋轉(zhuǎn)的支柱上。使用動物行為分析軟件來跟蹤記錄和分析小鼠的運動軌跡及時間。具體實驗步驟如下：第一天正式實驗開始前兩個小時提前將小鼠安置于黑暗安靜環(huán)境中，并依次單獨置于躲避盒內(nèi)適應(yīng)2min。將實驗小鼠從黑暗環(huán)境取出，放置于位于迷宮中央的黑色起始盒內(nèi)。移開起始盒，開始追蹤小鼠軌跡。當(dāng)小鼠身體完全進入躲避盒，則計為成功逃避，并讓小鼠在躲避盒內(nèi)停留30s，每次最多觀察4min。若在此期間，小鼠未能夠成功找到躲避盒，則將小鼠人為放入躲避盒內(nèi)并停留30s。每只動物開始前都要使用酒精對迷宮進行除味。之后第2-5天實驗步驟均同上，除去單獨放入躲避盒內(nèi)適應(yīng)，且要保證都在同一時間段內(nèi)進行，并且每天訓(xùn)練時最好將迷宮隨機轉(zhuǎn)動數(shù)個洞的位置，但要確保躲避盒始終固定在同一方位，以防止小鼠依靠氣味而非記憶來確定躲避盒的位置。實驗參數(shù)：找到安全盒的潛伏期（時間）和在此之前的錯誤次數(shù)（小鼠把頭伸向或嗅探任何一個非目標(biāo)洞記為一次）。新物體識別實驗新物體識別實驗是利用小鼠對于新奇物體的探索行為而設(shè)計的檢測學(xué)習(xí)記憶的方法。實驗分為兩天進行，第一天是學(xué)習(xí)階段和短期記憶階段，第二天是長期記憶階段。在實驗開始的前一天，將小鼠置于實驗箱（50cm×50cm×50cm）中飼養(yǎng)以提前適應(yīng)實驗盒子。在第一天學(xué)習(xí)階段，在實驗箱的左上角和右上角放置完全相同的兩個柱形隔離籠，快速將小鼠面向兩隔離籠，放置于底部中間位置，然后啟動追蹤記錄軟件，使小鼠在箱內(nèi)自由探索10min。之后將小鼠取出，單獨置于一鼠籠，等待30min以進行短期記憶測試。在短期記憶階段，在將試驗箱右上角的物體換為以新奇物體，然后按照學(xué)習(xí)階段方法將小鼠放入箱內(nèi)使其自由探索5min。間隔24h后，進行第二天的長期記憶階段，與第一天短期記憶階段實驗相同。實驗使用動物行為分析軟件記錄并分析小鼠各個階段的探索過程及對不同物體的探索時間。注意：實驗要保證在安靜環(huán)境下進行，并且每一只小鼠進行實驗前都要使用酒精對試驗箱及物體進除味。高架十字迷宮實驗高架十字迷宮實驗是用于檢測小鼠焦慮樣情緒的實驗。該實驗使用十字形迷宮，包含兩個開放臂，兩個閉合臂，相間排列，開放臂為44cm×12cm，閉合臂膀為44cm×12cm×30cm，整個裝置離地高100cm。測試之前，使用酒精擦拭除去殘留氣味。測試時，將小鼠放入到中心區(qū)域，使頭朝向開放臂，并用動物行為分析軟件記錄和分析小鼠在10min的運動軌跡及時間。使用開放臂的停留時間與總時間的比值來衡量小鼠的焦慮水平。病毒介導(dǎo)的突觸核蛋白過表達誘導(dǎo)運動缺陷，但對運動、焦慮或空間記憶的影響很小在MPTP誘導(dǎo)的早期PD模型中，運動皮層的樹突有著顯著升高的轉(zhuǎn)化率，并且其鈣活動也增加了三倍以上。在注射AAV-SNCA和AAV-mCherry的同時，等比例混入了鈣指示劑AAV-CaMKIIα-GCaMP6s到運動皮層的第五層，等病毒表達21天后進行鈣成像。聚核蛋白過表達導(dǎo)致皮質(zhì)過度活躍